求助（生物材料）

dart

1楼 大 中 小 发表于 2010-6-16 20:48 只看该作者

求助（生物材料）

不知道小组里有没有在分子生物学方面搞研究的。本人最近实验遇到了个问题，需要表达蛋白的宿主菌【BL21/DE3-Rosetta和Rosetta-gami

(DE3)】。如果小组里有从事这方面研究的，希望得到你们的帮助。虽然知道希望不大，不过还是试试了。

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wowo_steve

披着羊皮的喔喔狼 @wowo_steve

2楼 大 中 小 发表于 2010-6-16 21:31 只看该作者

既然是真菌，能想到的无非就是质粒，培养基，摇大瓶，然后破碎离心上柱子。你希望菌去表达蛋白，那你的质粒上应该设计好启动子片段，你到时候往大瓶里加引发剂就好了。

但是，上面这些都是空话，对你没有帮助。你应该在你实验室里问清楚这些protocol。细菌表达蛋白是个很老套的实验了，不会查不出资料的。你在这里即使发出你的质粒全图，估计也讨论不出所以然。实验室始终应该是你的第一信息来源。如果你是你们实验室第一个跳生物坑的，就问问生物系的同学好了。

理想青年狗

靓仔

3楼 大 中 小 发表于 2010-6-17 00:06 只看该作者

藏龙卧虎啊

firedragoon

自由新闻社驻枫叶国通讯员

4楼 大 中 小 发表于 2010-6-17 00:37 只看该作者

i got a close friend who might be familiar w/ this. i’ll forward the above to

him and let’s keep in touch

dart

5楼 大 中 小 发表于 2010-6-17 11:16 只看该作者

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谢谢。我用的表达载体（质粒）是商品化的，质粒自身已经带有了强启动子。所以只是少两个表达宿主菌。

dart

6楼 大 中 小 发表于 2010-6-17 11:20 只看该作者

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tks

firedragoon

自由新闻社驻枫叶国通讯员

7楼 大 中 小 发表于 2010-6-17 12:44 只看该作者

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原话摘录：

last time i did the similar thing was about 9 years ago.

i did not do a lots work with protein overexpression in E.coli (BL21 is a kind

of e.coli, not fungi).

i could get the information for the overexpression from my former

colleagues，some of them are good on it.